植物基因組DNA快速提取試劑

特*配方的植物 DNA 抽提液（添加多種針對(duì)植物特點(diǎn)的多糖、多酚去除成份）迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，只需一步離心即可去除多糖、多酚和蛋白，取上清所得基因組 DNA 用異丙醇沉淀，再通過乙醇漂洗等步驟得到純凈的 DNA。

注意事項(xiàng)（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)首先閱讀這部分?。?.所有的離心步驟均在室溫完成，使用離心力可以達(dá)到13,000×g 的高速離心機(jī)。2.開始實(shí)驗(yàn)前將需要的試劑水浴先預(yù)熱到65℃?zhèn)溆?，Rnase A（10mg/ml）請(qǐng)自備，TE或者無酶水請(qǐng)自備。3.不同來源的植物組織材料中提取的DNA 的量會(huì)有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25ug。4.可以按比例放大提取的體系。 

操作步驟* 將 DNA 提取試劑放置在 65℃預(yù)熱。1.加熱 DNA 提取試劑到 65℃。2.取50-100 mg植物新鮮組織或30mg干重組織在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉，或用研磨儀研磨（可以加入預(yù)熱的 DNA 提取試劑研磨）。3.轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個(gè) 1.5 ml 離心管中，加入 1ml~1.2ml 預(yù)熱好的 DNA 提取試劑，再加入 10ul RNase A 劇烈渦旋振蕩混勻 1 分鐘，65℃水浴 30分鐘。4.將離心管轉(zhuǎn)入離心機(jī)中 13,000×g 室溫離心 3 分鐘。下面有兩種抽提方法：1）無酚氯仿提取法：a.小心吸取 800ul 上清到一個(gè)新的 2ml 離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)，加入 1.2ml 異丙醇混合均勻，13,000×g 離心 2 分鐘。b.小心倒掉上清，注意不要倒掉沉淀，加入 1ml 的 70%乙醇震蕩漂洗DNA，13,000×g 離心 2 分鐘沉淀 DNA，棄上清。c.重復(fù)步驟 b。d.用槍盡可能吸取多余的乙醇（注意不要將沉淀的 DNA 吸走），室溫晾 2 分鐘左右使乙醇揮發(fā)，加入 100ul TE 溶解 DNA?？赡軙?huì)有部分沉淀無法溶解，可以離心后取上清。e.DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長時(shí)間存放，可以放置在-20℃。2）酚氯仿提取法：a.轉(zhuǎn)移第 4 步 800ul 上清到一個(gè)新的 2ml 離心管，加入等體積的酚：氯仿：異戊醇=25：24：1 的混合液，渦旋振蕩 1min，室溫放置 5min。b.13000×g 離心 2 分鐘，小心吸取上清到一個(gè) 2ml 離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)，與等體積異丙醇混合均勻，13,000×g 離心 2 分鐘。c.小心倒掉上清，加入 1ml 的 70%乙醇漂洗 DNA，13,000×g 離心 2分鐘。d.重復(fù)步驟 c。e.用槍盡可能吸取多余的乙醇，室溫2分鐘左右使乙醇揮發(fā)，加入100ulTE 溶解 DNA。f.DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長時(shí)間存放，可以放置在-20℃。

保存條件：室溫

本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

上海牧榮生物科技有限公司

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