減少背景染色有兩種方法：（a）在銀增強之前和期間修改實驗條件;或（b）改善銀增強反應(yīng)的“停止"或在完成后應(yīng)用回顯影。

減少反應(yīng)過程中的背景

在使用熒光素和納米金®探針FluoroNanogold的組合實驗中，發(fā)現(xiàn)在銀增強之前用0.02 M檸檬酸鈉緩沖液（pH 7.0）洗滌，其背景明顯低于許多其他處理。當(dāng)使用Danscher銀增強劑進行開發(fā)時，發(fā)現(xiàn)這是有效的。當(dāng)納米探針 總部銀色 使用0.02 M檸檬酸鈉緩沖液在銀增強前的pH 3.5下給予較低的背景。在免疫印跡中，我們發(fā)現(xiàn)銀增強前的0.05 M二鈉EDTA，pH 4.6也有助于最小化背景。

向Nanogold®孵育緩沖液中加入少量洗滌劑吐溫-20有助于防止疏水相互作用，這可能是非特異性結(jié)合的另一個來源。如果樣品可以耐受，用0.6 M三乙基碳酸氫銨緩沖液洗滌，其中納米金®是高度可溶的，也可以降低背景。

“停止"反應(yīng)和反向開發(fā):

在大多數(shù)情況下，用去離子水或蒸餾水反復(fù)洗滌就足以停止銀增強過程。然而，它可能會在標(biāo)本內(nèi)繼續(xù)存在，這有時會在光學(xué)顯微鏡下導(dǎo)致過度顯影或深色外觀。在這種情況下，可以使用以下方法之一來“停止"銀增強反應(yīng)：

• 1%醋酸。

• 1%醋酸，然后是照相定影劑（Agefix，Agfa-Gevaert或Ilfospeed 200，Ilford）。

• 直接照片修復(fù)，使用剛才提到的那些。

• 用2.5%氯化鈉短暫沖洗。

• 15-25%硫代硫酸鈉水溶液加15%亞硫酸鈉。

• 1%乙酸，在乙酸鹽緩沖液中洗滌，在0.05%氯化氫中調(diào)色₄ 3-10分鐘，用3%硫代硫酸鈉除去多余的銀。我們發(fā)現(xiàn)，在聚丙烯酰胺凝膠上運行的納米金標(biāo)記蛋白質(zhì)在用10%乙酸和10%葡萄糖在水中停止時保持低背景，而不僅僅是水停止。

如果反應(yīng)進行得太遠，可以通過 Farmer 溶液（0.3 ml 7.5% 鐵氰hua鉀、1.2 ml 20% 硫代硫酸鈉、60 ml 水）處理來“反向顯影"以去除多余的背景染色.在金色調(diào)色之前將此溶液短暫地應(yīng)用于您的樣品可能有助于去除背景銀沉積。